自 1874 年血細胞計數(shù)儀計數(shù)室發(fā)明以來，生物學家一直在通過顯微鏡下的人工檢查來定量分配到載玻片室中的細胞。這些量化依賴于了解您正在計數(shù)的確切體積。使用血細胞計數(shù)器計數(shù)細胞時，以下公式用于將給定表面積/體積中的細胞計數(shù)轉(zhuǎn)換為細胞/mL 濃度：

基于圖像的自動細胞計數(shù)儀利用相同的原理在相機上定量已知體積的細胞。這種系統(tǒng)的主要好處是它們可以提供答案的速度和可重復(fù)性。例如，對于大多數(shù)樣品，DeNovix CellDrop 自動細胞計數(shù)儀上的明場和雙通道熒光計數(shù)不超過 10 秒。手工計數(shù)大多數(shù)樣品并正確計算濃度需要幾分鐘。

手動細胞計數(shù)的挑戰(zhàn)

手動計數(shù)樣品中的活細胞需要經(jīng)驗來區(qū)分細胞類型、碎片和紅細胞。不難想象，實驗室的每個成員都可能以不同的方式解釋同一樣品，從而導(dǎo)致樣品圖像中的細胞濃度不同。另一方面，自動細胞計數(shù)儀利用一種算法，其中包含有關(guān)細胞表征方式的規(guī)則，因此計數(shù)不會因用戶而異。

血細胞計數(shù)器依靠一種稱為臺盼藍的比色染色劑來評估細胞活力。臺盼藍的作用是進入膜受損的死細胞并將其染成深藍色。這種染料無法區(qū)分紅細胞或其他容易被誤認為是活細胞和實際目標細胞的碎片。這可能導(dǎo)致懸浮液中活細胞的高估，從而可能扭曲活細胞的準確計數(shù)。

為什么自動細胞計數(shù)可以提高準確性和效率

作為血細胞計數(shù)器的替代品，現(xiàn)代細胞計數(shù)儀（基于圖像的自動細胞計數(shù)儀）克服了這些問題。這些系統(tǒng)使用先進的成像和軟件算法在幾秒鐘內(nèi)分析細胞計數(shù)和活力。與手動方法不同，自動計數(shù)器：

• 標準化細胞計數(shù)測量。

• 通過應(yīng)用統(tǒng)一規(guī)則來識別樣品中的細胞數(shù)量，消除不一致。

• 提供準確的計數(shù)，沒有用戶偏見。

此外，基于熒光的活力染色為臺盼藍染色提供了更可靠的替代方案，因為它選擇性地僅標記有核活細胞，從而提高了細胞計數(shù)和活力評估的精度。

像 CellDrop 這樣的自動細胞計數(shù)儀可以使用一對稱為吖啶橙和碘化丙啶 （AO/PI） 的熒光活力染色劑。這些熒光染色劑的組合根據(jù)細胞核的存在特異性識別活細胞和死細胞，因為染料僅與 DNA 結(jié)合。這些污漬不會與紅細胞或未成核的碎片相互作用，從而消除了主觀性并提高了精度。

總而言之，基于圖像的自動細胞計數(shù)儀需要較少的培訓和專業(yè)知識來作，同時提高了整個實驗室細胞計數(shù)的精度。計數(shù)也可以在手動計數(shù)類似樣品所需時間的一小部分內(nèi)進行。通過使用熒光活力染色劑，整個過程得到了進一步改進。最終，已經(jīng)存在了 150 年的定量方法仍然適用于自動細胞計數(shù)儀，只是通過現(xiàn)代計算技術(shù)提高了效率。

最后的思考

對于希望提高細胞培養(yǎng)工作流程準確性和效率的實驗室來說，自動細胞計數(shù)儀提供了傳統(tǒng)計數(shù)室的替代方案。通過消除用戶差異、結(jié)合基于熒光的染色并縮短計數(shù)時間，這些設(shè)備可確保以最小的努力精確測量細胞濃度（以細胞/mL 為單位）。