LipoD293™ In Vitro DNA Transfection Reagent  產(chǎn)品型號：SL100668

通過利用我們創(chuàng)新的特色脂質(zhì)結(jié)合技術(shù)，LipoD293(Ver. II)是通過添加用于轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞和其他哺乳動物細(xì)胞的有增強(qiáng)子而專門設(shè)計和配制的(圖1)。作為第二代基于脂質(zhì)體的DNA轉(zhuǎn)染試劑，lipod 293(Ver II)為HEK293相關(guān)細(xì)胞以及許多細(xì)胞毒性較低的哺乳動物細(xì)胞提供高效率。LipoD293試劑(Ver. II)從其先前版本升級而來，具有精細(xì)的化學(xué)性質(zhì)，在基因遞送方面的效率提高了3~4倍。LipoD293試劑(Ver. II)，1.0 ml，足以在24孔板中進(jìn)行約666次轉(zhuǎn)染或在6孔板中進(jìn)行約333次轉(zhuǎn)染。


圖一。一幅展示LipoD293(版本。II)增強(qiáng)的基因遞送

特征
-難以轉(zhuǎn)染細(xì)胞的選擇
-病毒產(chǎn)量高
-同樣適用于很長的DNA(高達(dá)180 kb)
-同樣適用于懸浮293細(xì)胞(如293F、293H等)
-高水平的重組蛋白生產(chǎn)
-血清和抗生素的存在提高了293細(xì)胞的效率
-單DNA轉(zhuǎn)染和多DNA共轉(zhuǎn)染的高效率
-非常實(shí)惠

儲存條件
儲存在4°c。如果儲存得當(dāng)，該產(chǎn)品可穩(wěn)定儲存12個月或更長時間。

lipod 293 DNA體外轉(zhuǎn)染試劑(Ver。II)品牌產(chǎn)品

LipoD293試劑轉(zhuǎn)染效率的比較(版本II)對HepG2細(xì)胞的lipofectamine 2000 (L2K)和Fugene HD。
右圖:LipoD293轉(zhuǎn)染效率的比較(版本。II)用Lipofecatmine 2000 (L2K)和Fugene HD對HepG2細(xì)胞進(jìn)行處理。GFP DNA (pEGFP-N3)按照生產(chǎn)商的方案用不同的轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞(在膠原蛋白預(yù)處理的培養(yǎng)皿上培養(yǎng))。轉(zhuǎn)染后48小時通過流式細(xì)胞儀檢測GFP陽性細(xì)胞(%)和熒光強(qiáng)度
左圖:血清和抗生素的存在增強(qiáng)了LipoD293(版本。II)對HepG2細(xì)胞的效率。用三種不同的條件轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞(在膠原蛋白處理的培養(yǎng)皿上生長)——不含血清和抗生素，存在10%血清和抗生素，轉(zhuǎn)染后5小時去除，存在10%血清和抗生素，轉(zhuǎn)染后5小時不去除。


LipoD293試劑轉(zhuǎn)染效率的比較(版本II)對CHO細(xì)胞的lipofectamine 2000 (L2K)、TransIT和Fugene 6。
右側(cè)面板:比較LipoD293的轉(zhuǎn)染效率(Ver。II)用Lipofecatmine 2000 (L2K)、TransIT和Fugene 6對CHO細(xì)胞進(jìn)行處理。編碼海腎螢光素酶(phRL-CMV)和GFP (pEGFP-N3)的DNA用不同的DNA轉(zhuǎn)染試劑按照制造商的方案轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染后24小時，分別用海腎檢測系統(tǒng)和Nikon Eclipse熒光顯微鏡檢測海腎熒光素酶活性和GFP熒光。
左側(cè)面板:LipoD293與Lipofecatmine 2000 (L2K)、TransIT和Fugene 6的價格(美元/1.0毫升小瓶)比較。所有的價格都是從制造商的網(wǎng)站上收集的。


LipoD293試劑與lipofectamine 2000 (L2K)對難以轉(zhuǎn)染的細(xì)胞(原代大鼠主動脈平滑肌細(xì)胞)的轉(zhuǎn)染效率的比較。按照制造商的方案，分別通過LipoD293試劑(左圖)和Lipofecatmine 2000 (L2K，右圖)制備大鼠主動脈平滑肌細(xì)胞并用pEGFP-N3轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染效率通過在轉(zhuǎn)染后24小時用Nikon Eclipse 2000顯微鏡檢測GFP熒光來評估。以上圖片由芝加哥大學(xué)肺部和重癥監(jiān)護(hù)科的尼古拉·杜林博士提供。


LipoD293試劑與Fugene HD對難以轉(zhuǎn)染細(xì)胞LNCap細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率的比較。LNCap細(xì)胞按照ATCC推薦的程序生長，并按照制造商的方案分別用每孔(6孔板)pBabe-hygro-SSeCKs (1.5ug)和peg FP-N3(0.5 ug)lipod 293試劑(左圖)和Fugene HD(右圖)共轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染效率通過在轉(zhuǎn)染后24小時用Nikon Eclipse 2000顯微鏡檢測GFP熒光來評估。以上圖片由羅斯威爾公園癌癥研究所的Lyn Gao博士提供。


兩個實(shí)例顯示了LipoD293試劑對難以轉(zhuǎn)染的細(xì)胞(如HepG2和SaoS-2細(xì)胞)的功效。95%融合的HepG2和SaoS-2細(xì)胞用pEGFP-N3和pSV-？-半乳糖苷酶DNA，分別存在于血清/抗生素中。轉(zhuǎn)染后48小時，通過Zeiss 510共聚焦顯微鏡和？-半乳糖苷酶染色試劑盒。



LipoD293試劑與293轉(zhuǎn)染素對HEK293細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的比較。使用LipoD293體外DNA轉(zhuǎn)染試劑(Ver)用pEGFP-C1質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的HEK293細(xì)胞。II)(上圖)和Invitrogen受歡迎的品牌產(chǎn)品293fectin(下圖)。轉(zhuǎn)染后24小時，通過Nikon Eclipse熒光顯微鏡用DIC相位成像(左圖)和FITC成像(右圖)觀察細(xì)胞。


LipoD293試劑與293fectin、Xfect和Fugene 6轉(zhuǎn)染試劑對懸浮293F細(xì)胞蛋白質(zhì)生產(chǎn)的比較。30毫升使用LipoD293體外DNA轉(zhuǎn)染試劑(Ver)用pEGFP-6xHis質(zhì)粒轉(zhuǎn)染在標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基中培養(yǎng)的293F細(xì)胞。II) (20微克質(zhì)粒DNA)、293轉(zhuǎn)染素(30微克質(zhì)粒DNA)、x轉(zhuǎn)染素(30微克質(zhì)粒DNA)和Fugene 6 (30微克質(zhì)粒DNA)。轉(zhuǎn)染后48小時觀察GFP熒光(左圖), A代表LipoD293，B代表293轉(zhuǎn)染素，C代表x轉(zhuǎn)染素，D代表Fugene 6。然后純化6xHis標(biāo)記的GFP蛋白一個尼-NTA阿芬尼特y列。在SDS-PAGE上解析5 ul第一洗脫級分，隨后進(jìn)行考馬斯亮藍(lán)染色(右上圖E ),泳道1用于LipoD293，泳道2用于蛋白質(zhì)標(biāo)記，泳道3用于Xfect，泳道4用于293fectin，泳道5用于Fugene 6。蛋白質(zhì)產(chǎn)量通過分光計定量(右下圖F)。



LipoD293(版本II)和脂質(zhì)體LTX (LTX)對慢病毒(LV)產(chǎn)生的影響。用lipod 293(Ver。II)和Lipofectamine LTX (LTX)導(dǎo)入293英尺細(xì)胞。GFP載體pHR-SIN-cppt-CMVEWP用于測定LV的滴度。將每孔1×105個293F細(xì)胞鋪在24孔板中，然后加入不同量的載體上清液，分別為1微升(上圖)和10微升(下圖)。5天后，用FACS傳代細(xì)胞。右上角的數(shù)字表示轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞的百分比。用LipoD293和L2K產(chǎn)生的左心室的滴度分別被定量為8x10^6和3x10^6 tu/ml

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